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SCREENflex
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Übersicht
Konventionelle Strategien zur Gewinnung von stabilen Zelllinien basieren häufig auf der zufälligen Integration des gewünschten Expressionsvektors in das Genom der Zielzelle. Sowohl die Anzahl der integrierten Kopien, als auch der »Ort« der Integration, beeinflussen maßgeblich die Stabilität und Höhe der Genexpression (z. B. Drug Targets). Daher ist die Isolation einer geeigneten Zelllinie eine aufwändige Prozedur – ohne Erfolgsgarantie.
Die SCREENflex-Technologie ist das Ergebnis von mehr als 10 Jahren Forschungsarbeit und der Idee, dass die Expression einer einzelnen Genkopie ausreichend ist – insofern ein geeigneter genomischer Integrationsort gefunden und markiert werden kann.
Unsere SCREENflex-Master-Zelllinien tragen eine solche Einzelkopie in einem geeigneten Integrationsort und gewährleisten die stabile Transgenexpression. Dazu wurde eine »Markierungs«- und Selektionsprozedur entwickelt mit der ein Set von verschiedenen Masterzellen isoliert werden konnte. Diese markierten Masterzellen sind hervorragend zur Herstellung von stabilen Zellen für »Drug Screening Campaigns« geeignet.
Dazu muss lediglich in einem einzigen Transfektionsschritt die Markierungskassette einer SCREENflex-Masterzelllinie gegen ein Drug Target oder »Kundengen« (dies kann ein GPCR, Ionenkanal oder eine Kinase sein) ausgetauscht werden. Durch die Kombination von DNA-Rekombinase und einer »Selektionsfalle« werden keine weiteren chromosomalen Regionen berührt und alle positiven Eigenschaften der Masterzelle (Expression, Wachstum) auf die neue Screeningzelle transferiert.
InSCREENeX' Master-Zelllinien basieren auf CHO-K1 und HEK293 Zellen.
Unsere SCREENflex-Technologie ist bereits in mehreren Publikationen beschrieben worden:
Rapid establishment of g-protein-coupled receptor-expressing cell lines by site-specific integration.Schucht R, Lydford S, Andzinski L, Zauers J, Cooper J, Hauser H, Wirth D, May T. J Biomol Screen. 2011 | link |
Integrated strategy for the production of therapeutic retroviral vectors.Carrondo M, Panet A, Wirth D, Coroadinha AS, Cruz P, Falk H, Schucht R, Dupont F, Geny-Fiamma C, Merten OW, Hauser H.Hum Gene Ther. 2011
Recombinant protein expression by targeting pre-selected chromosomal loci. Nehlsen K, Schucht R, da Gama-Norton L, Krömer W, Baer A, Cayli A, Hauser H, Wirth D. BMC Biotechnol. 2009
Precise regulation of transgene expression level and control of cell physiology. Schucht R, Wirth D, May T. Cell Biol Toxicol. 2009
A new generation of retroviral producer cells: predictable and stable virus production by Flp-mediated site-specific integration of retroviral vectors. Schucht R, Coroadinha AS, Zanta-Boussif MA, Verhoeyen E, Carrondo MJ, Hauser H, Wirth D. Mol Ther. 2006
GPCRs
G Protein Coupled Receptors (GPCRs) sind die Ziele der Mehrzahl aller derzeitigen Medikamente. Basierend auf unseren SCREENflex-Masterzelllinien haben wir robuste Zellen etabliert, welche die wichtigsten GPCRs exprimieren. Hier finden Sie ein Anwendungsprotokoll, das von Molecular Devices (UK) mit unseren SCREENflex-CHRM3 Zellen etabliert wurde. | Download |
Aufgrund der einzigartigen Herstellungsprozedur bleibt die Expression der Zelllinien über Monate stabil, auch ohne Selektionsdruck. Unsere GPCR Zelllinien werden von ECACC (UK) vertrieben. | Katalog |
Cells-on-Demand
Unsere SCREENflex-Technologie erlaubt ein hohes Maß an Flexibiliät. Entsprechend Ihren Anforderungen etablieren wir stabile Zellen mit Ihrem gewünschten Wirkstoff-Target. | Zur Anfrage ... |